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GeneXpert MTB RIF系统在结核分枝杆菌和利福平耐药性快速检测中的应用

来源:检验医学  日期:2017-12-07   点击数:
Xpert MTB/RIF系统在结核分枝杆菌和利福平耐药性快速检测中的应用
徐东芳, 王庆
摘要

目的 探讨Xpert MTB/RIF系统在结核分枝杆菌(MTB)及利福平耐药性快速检测中的应用。方法 收集2015年4–12月在安徽省胸科医院住院的616例肺结核和可疑患者痰液或肺泡灌洗液(BALF)样本,同时进行Xpert MTB/ RIF系统、液体培养法和直接涂片法3种方法检测,以临床诊断为金标准进行统计分析。结果 Xpert MTB/ RIF系统、液体培养法和直接涂片法检测MTB的敏感性分别为39.61%(225/568)、36.44%(207/568)和17.78%(101/568),Xpert MTB/RIF系统检测的敏感性与液体培养法有较好的一致性( χ2=1.21, P>0.05),显著高于直接涂片法( χ2=66.15, P<0.05)。在对利福平耐药性的检测中,Xpert MTB/RIF系统检出菌株对利福平的耐药率为19.40%(39/201),Xpert MTB/RIF系统的敏感性和特异性分别为94.59%(35/37)和97.56%(160/164),与液体培养法药物敏感性试验相比,差异无统计学意义( χ2=0.167, P>0.05)。对所有培养阳性物进行利福平耐药基因分析,以测序法作为金标准进行 rpoB耐药基因检测,Xpert MTB/RIF系统检测利福平耐药位点以Probe E(58.98%,23/39)为主,测序法以S531L和L533P(62.16%,23/37)为主,2种方法突变位点基本一致( χ2 =0.081, P>0.05)。结论 Xpert MTB/RIF系统检测MTB及利福平耐药性具有较高的临床应用价值。

关键词: 结核分枝杆菌; 利福平; 耐药; Xpert MTB/RIF系统

中图分类号:R446.5 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2017)08-0722-05 DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2017.08.014

结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)感染引起的一种具有强烈传染性的慢性疾病, 以肺结核最为常见, 是导致人类死亡的主要疾病之一。根据2015年世界卫生组织(World Health Organization, WHO)报告, 2014年我国新发肺结核约93万例, 仅次于印度和印度尼西亚, 居全球第3位[1]。我国十三五结核病防治规划的目标是:在2030年使肺结核发病率降低80%, 病死率降低90%。要实现这个目标, 必须实行结核病的早期诊断及其耐药性检测。然而当前我国基层的结核病实验室基础设施薄弱, 结核病的确诊仍然依赖传统的涂片和培养方法, 检出率低, 培养周期长, 生物安全要求高。因此, 2010年WHO推荐Xpert MTB/ RIF系统用于结核病的快速诊断和利福平耐药性检测[2], 该技术在我国结核病防治机构被初步使用, 诊断性能方面的研究处于起步阶段。本研究采用Xpert MTB/RIF系统对肺结核及其可疑患者晨痰或肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)样本进行MTB及其对利福平耐药性的检测, 进而评价Xpert MTB/RIF系统在耐多药结核病快速诊断中的价值。

1 材料和方法
1.1 一般资料

选取2015年4– 12月安徽省胸科医院连续收治的肺结核和可疑肺结核患者632例, 其中 Xpert MTB/RIF系统报错或利福平耐药结果不确定19例(3.0 %), 重新留取样本均有结果。统计剔除液体培养污染16例, 用剩余616例有效数据进行统计分析。其中肺结核患者568例, 男381例, 女187例, 年龄(43± 9)岁。同期选取48例其他肺部疾病(肺癌19例、肺炎16例、支气管扩张13例)患者作为对照, 男32例, 女16例, 年龄(39± 6)岁。以细菌学检查阳性为确诊结核病的依据, 无细菌学阳性结果者则按《临床诊疗指南:结核病分册》[3]作出诊断。

1.2 主要仪器与试剂

分枝杆菌液体培养所用的BACTEC MGIT960系统、MGIT管和利福平药粉均由美国BD公司生产, Xpert MTB/RIF设备和试剂盒由美国Cepheid公司生产, 抗酸染液由贝索公司生产。

1.3 方法与结果判定

1.3.1 痰菌检测方法 留取所有研究对象1份晨痰或BALF样本, 按《分枝杆菌分离培养标准化操作程序及质量保证手册》[4]进行N-乙酰-L-半胱氨酸-NaOH消化处理, 消化后的菌液重悬于1.1 mL的磷酸盐缓冲液中, 取0.1 mL按照实验室规范进行涂片抗酸染色检测, 0.5 mL用于Xpert MTB/RIF系统检测, 具体操作按参考文献[4]进行, 另外0.5 mL按照BACTEC MGIT 960系统用户手册接种于分枝杆菌培养瓶中进行液体培养法检测。

1.3.2 rpoB耐药基因核心区间测序 上游引物为5'-TCAAGGAGAAGCGCTACGA-3', 下游引物为5'-GGATGTTGATCAGGGTCTGC-3'。扩增条件:94 ° C 5 min, 94 ° C 1 min, 60 ° C 1 min, 72 ° C 1 min, 共35个循环, 引物的合成和产物测序在生工生物工程(上海)股份有限公司进行, 测序结果在NCBI网站采用局部相似性基本查询工具(basic local alignment search tool, BLAST)进行分析[5]。

1.3.3 结果判读 直接涂片法结果根据抗酸染色量的多少判为4+、3+、2+、1+和阴性; 液体培养法根据BACTEC MGIT 960系统报阳情况, 采用涂片萋尼染色镜检排除杂菌的污染后, 再进行液体药物敏感性试验, 并计算仪器的报阳时间; Xpert MTB/ RIF系统的结果以高、中、低、极低和未检出5个量级来表示, 循环次数(cycle time, CT)< 16, MTB检出高; CT为16~22, MTB检出中等; CT为 23~28, MTB检出低; CT为29~38, MTB检出极低; CT > 38, MTB未检出。5种分子探针(Probe A、B、C、D、E)表示利福平ropB基因的不同耐药位点。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行统计学分析, 组间比较采用χ 2检验, 以P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 直接涂片法、液体培养法及Xpert MTB/RIF系统检测MTB的效能评价

616例患者进行实验室诊断效能评价, 以临床诊断结果为金标准, 直接涂片法、液体培养法和Xpert MTB/RIF系统检测MTB的敏感性分别为17.78%(101/568)、36.44%(207/568)和39.61%(225/568)。Xpert MTB/RIF系统检测的敏感性与液体培养法有较好的一致性(χ 2=1.21, P> 0.05), 显著高于直接涂片法(χ 2=66.15, P< 0.05)。见表1。


2.2 Xpert MTB/RIF系统检测MTB效能分析

在568例肺结核患者中, 直接涂片法阳性101例, 阴性467例。以液体培养法为金标准, 在直接涂片法阳性患者中Xpert MTB/RIF系统检测MIB的敏感性和特异性分别为96.77%(90/93)和62.50%(5/8), Xpert MTB/RIF系统与液体培养法差异无统计学意义(χ 2=0.167, P> 0.05), 在直接涂片法阴性患者中Xpert MTB/RIF系统检测MTB的敏感性和特异性分别为94.74%(108/114)和 93.20%(329/353), Xpert MTB/RIF系统与液体培养法差异有统计学意义(χ 2=9.63, P< 0.05); 在全部568例肺结核Xpert MTB/RIF系统检测MTB的患者中的敏感性为95.65%(198/207), 特异性为92.52%(334/361)。见表2。


2.3 Xpert MTB/RIF系统半定量结果与直接涂片法细菌计数、培养时间的关系

Xpert MTB/RIF系统检测MTB结果分为高、中、低、极低和未检出5个量级, 其中在21例高量级样本中, 液体培养法均阳性, 培养报阳时间为17 d, 直接涂片法阳性19例中, 涂片阳性级别3+~4+者16例(76.19%); 在69例极低量级样本中, 液体培养法阳性54例(78.26%), 报阳时间为29 d, 仅有6例直接涂片法阳性(8.70%); 在Xpert MTB/RIF系统未检出的343例样本中, 发现6例直接涂片法阳性, 其中液体培养法阳性5例, 报阳时间为40 d。见表3。


2.4 Xpert MTB/RIF系统对利福平耐药性分析

对Xpert MTB/RIF系统、液体培养法均阳性的201例菌株同时进行药物敏感性试验, 结果显示Xpert MTB/RIF系统、液体培养法药物敏感性试验检出菌株对利福平的耐药率分别为19.40%(39/201)和18.41%(37/201), 2种方法差异无统计学意义(χ 2=0.167, P> 0.05)。以液体培养法药物敏感性试验为金标准, Xpert MTB/RIF系统检测菌株对利福平耐药的敏感性和特异性分别为94.59%(35/37)和97.56%(160/164), 见表4。Xpert MTB/RIF系统检测利福平耐药位点主要以探针Probe E(58.98%, 23/39)为主, 集中在位点529~533之间, rpoB测序法耐药类型以S531L和L533P(62.16%, 23/37)为主, 2种方法突变位点基本一致(χ 2 =0.081, P> 0.05), 见表5。



3 讨论

耐多药结核病给全球结核病控制带来了严峻的挑战, 早期快速的诊断是合理治疗的基础, 也是耐药结核病防治的关键。如果耐多药结核病不能得到及时、准确的诊疗, 最终会导致继发性耐药的产生和结核病死亡率的增加[6]。随着分子生物学技术的突飞猛进, 耐药结核病相关耐药基因快速诊断技术的使用日益广泛。Xpert MTB/RIF系统就是一种全新的快速诊断结核病和检测MTB耐药性的系统, 该系统针对MTB的81 bp利福平耐药核心区间(RRDR)设定引物、探针并进行扩增检测, 根据其是否发生基因突变来检测样本中是否含有MTB及其是否对利福平耐药, 可以全自动地对样本进行核酸提取、纯化及浓缩, 在2 h内出结果, 为全自动一体化半定量巢式实时聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)系统[7, 8]。

本研究采用抗酸染色直接涂片法、液体培养法和Xpert MTB/RIF系统对616例患者痰液或BALF样本进行检测, Xpert MTB/RIF系统检测的敏感性与液体培养法有很好的一致性(χ 2=1.21, P> 0.05), 显著高于直接涂片法(χ 2=66.15, P< 0.05)。在101例直接涂片法阳性患者中, Xpert MTB/ RIF系统检出阳性93例, 敏感性和特异性分别为96.77%(90/93)和62.50%(5/8), 与液体培养法比较, 差异无统计学意义(χ 2=0.167, P> 0.05)。在467例直接涂片法阴性患者中, Xpert MTB/ RIF系统检出阳性132例, 液体培养法阳性114例, Xpert MTB/ RIF系统与液体培养法差异有统计学意义(χ 2=9.63, P< 0.05), 说明Xpert MTB/ RIF系统不仅在直接涂片法阳性病例中保持了很好的检测性能, 而且在直接涂片法阴性病例的临床使用中也有较好的敏感性和特异性, 这一点与国内外研究结果[9, 10, 11]基本一致, 只是不同研究中的敏感性和特异性稍有不同, 可能与研究中采用的“ 金标准” 不同有关。

Xpert MTB/RIF系统检测MTB分为高、中、低、极低和未检出5个量级, 其中在21例高量级样本中, 液体培养法均阳性, 培养报阳时间为17 d, 直接涂片法阳性19例, 涂片阳性级别3+~4+者16例(76.19%); 在69例极低量级样本中, 液体培养法阳性54例(78.26%), 报阳时间为29 d, 仅有6例直接涂片法阳性(8.70%), 说明Xpert MTB/RIF系统半定量量级程度可能与样本中MTB菌数呈正比, 与阳性样本的MTB培养时间呈负相关, 量级数越高, 样本中含有的MTB菌数越多, 培养时报阳时间越短, 这与文献报道[12]相一致。在Xpert MTB/RIF系统未检出MTB的343例中, 共有6例直接涂片法阳性, 其中液体培养法阳性5例。3种方法不一致的原因可能是由于样本质量不好, MTB含量少或样本中含有Taq酶的抑制剂之故, 也有可能是样本前处理过量使Xpert MTB/RIF系统结果出现了假阴性, 从而造成该方法的漏诊。

在对利福平耐药性的检测中, Xpert MTB/RIF系统和液体培养法药物敏感性试验基本一致, 耐药率分别为19.40%(39/201)和18.41%(37/201), 二者差异无统计学意义(χ 2 =0.167, P> 0.05)。对培养阳性物进行利福平相关耐药基因ropB测序对比分析, 发现Xpert MTB/ RIF系统检测的利福平耐药位点主要以探针Probe E(58.98%, 23/39)为主, ropB测序法耐药类型以S531L和L533P(62.16%, 23/37)为主, 二者具有较高的符合率, 这一点与FRIEDRICH等[13]研究相符。对液体培养法药物敏感性试验结果不一致的6例菌株阳性培养物进行ropB基因测序分析结果显示, 有4例符合液体培养法药物敏感性试验利福平敏感, 2例符合Xpert MTB/RIF系统利福平耐药, 可能原因是Xpert MTB/RIF系统直接检测痰液或BALF样本, 对样本本身质量要求较高, 如唾液口水等含菌量少或带有血液和食物残渣的样本都可能会直接影响其结果, 会造成利福平耐药结果的不确定性甚至直接导致测试失败(如本实验有19例Xpert MTB/RIF系统报错, 利福平耐药结果不确定, 被剔除), 而液体培养法药物敏感性试验和ropB利福平耐药基因检测是通过阳性培养物进行的, 阳性培养物的菌量多, 结果也相对稳定。也可能是患者感染的是混合菌株, 经过培养后敏感株成为优势菌株, 使液体纯培养物测序为rpoB敏感, 而无法显示出现实存在的rpoB突变菌株。因此, 对于Xpert MTB/RIF系统阳性量级为极低, 且诊断为利福平耐药的患者需要使用传统药物敏感性试验或其他分子生物学方法进一步验证, 以避免假阳性的发生。但Xpert MTB/RIF系统检测MTB和利福平耐药性的时间能够缩短至2 h, 可以当天报告结果, 为结核病的早期诊断和治疗提供了可能, 可以缩短患者接受化疗的时间, 这一点具有良好的临床应用价值。

综上所述, Xpert MTB/RIF系统在快速检测MTB和利福平耐药性方面敏感性和特异性均较高, 且在一个完全封闭的检测盒中检测, 操作简便, 生物安全性好, 并具有高度全自动化。但Xpert MTB/RIF系统的设备和试剂盒成本较高, 短时期内在基层结核病防治和医疗机构推广尚存在一定的难度, 但随着医疗改革的深化和更多医保政策的优化, 该系统在临床的广泛应用会成为可能。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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乌拉圭vs波兰 葡萄牙vs德国 阿根廷vs德国 乌拉圭vs塞内加尔 西班牙vs墨西哥 冰岛vs墨西哥 乌拉圭vs哥伦比亚 摩洛哥vs瑞典 克罗地亚vs瑞典 乌拉圭vs日本 伊朗vs韩国 尼日利亚vs韩国 乌拉圭vs巴西 俄罗斯vs比利时 法国vs比利时 乌拉圭vs瑞士 沙特vs巴拿马 澳大利亚vs巴拿马 乌拉圭vs哥斯达黎加 埃及vs突尼斯 秘鲁vs突尼斯 乌拉圭vs塞尔维亚 乌拉圭vs英格兰 丹麦vs英格兰 乌拉圭vs德国 葡萄牙vs波兰 阿根廷vs波兰 乌拉圭vs墨西哥 西班牙vs塞内加尔 冰岛vs塞内加尔 乌拉圭vs瑞典 摩洛哥vs哥伦比亚 克罗地亚vs哥伦比亚 乌拉圭vs韩国 伊朗vs日本 尼日利亚vs日本 葡萄牙vs比利时 俄罗斯vs巴西 法国vs巴西 葡萄牙vs巴拿马 沙特vs瑞士 澳大利亚vs瑞士 葡萄牙vs突尼斯 埃及vs哥斯达黎加 秘鲁vs哥斯达黎加 葡萄牙vs英格兰 乌拉圭vs塞尔维亚 丹麦vs塞尔维亚 葡萄牙vs波兰 葡萄牙vs德国 阿根廷vs德国 葡萄牙vs塞内加尔 西班牙vs墨西哥 冰岛vs墨西哥 葡萄牙vs哥伦比亚 摩洛哥vs瑞典 克罗地亚vs瑞典 葡萄牙vs日本 伊朗vs韩国 尼日利亚vs韩国 葡萄牙vs巴西 俄罗斯vs比利时 法国vs比利时 葡萄牙vs瑞士 沙特vs巴拿马 澳大利亚vs巴拿马 葡萄牙vs哥斯达黎加 埃及vs突尼斯 秘鲁vs突尼斯 葡萄牙vs塞尔维亚 乌拉圭vs英格兰 丹麦vs英格兰 葡萄牙vs德国 葡萄牙vs波兰 阿根廷vs波兰 葡萄牙vs墨西哥 西班牙vs塞内加尔 冰岛vs塞内加尔 葡萄牙vs瑞典 摩洛哥vs哥伦比亚 克罗地亚vs哥伦比亚 葡萄牙vs韩国 伊朗vs日本 尼日利亚vs日本 西班牙vs比利时 俄罗斯vs巴西 法国vs巴西 西班牙vs巴拿马 沙特vs瑞士 澳大利亚vs瑞士 西班牙vs突尼斯 埃及vs哥斯达黎加 秘鲁vs哥斯达黎加 西班牙vs英格兰 乌拉圭vs塞尔维亚 丹麦vs塞尔维亚 西班牙vs波兰 葡萄牙vs德国 阿根廷vs德国 西班牙vs塞内加尔 西班牙vs墨西哥 冰岛vs墨西哥 西班牙vs哥伦比亚 摩洛哥vs瑞典 克罗地亚vs瑞典 西班牙vs日本 伊朗vs韩国 尼日利亚vs韩国 西班牙vs巴西 俄罗斯vs比利时 法国vs比利时 西班牙vs瑞士 沙特vs巴拿马 澳大利亚vs巴拿马 西班牙vs哥斯达黎加 埃及vs突尼斯 秘鲁vs突尼斯 西班牙vs塞尔维亚 乌拉圭vs英格兰 丹麦vs英格兰 西班牙vs德国 葡萄牙vs波兰 阿根廷vs波兰 西班牙vs墨西哥 西班牙vs塞内加尔 冰岛vs塞内加尔 西班牙vs瑞典 摩洛哥vs哥伦比亚 克罗地亚vs哥伦比亚 西班牙vs韩国 伊朗vs日本 尼日利亚vs日本 摩洛哥vs比利时 俄罗斯vs巴西 法国vs巴西 摩洛哥vs巴拿马 沙特vs瑞士 澳大利亚vs瑞士 摩洛哥vs突尼斯 埃及vs哥斯达黎加 秘鲁vs哥斯达黎加 摩洛哥vs英格兰 乌拉圭vs塞尔维亚 丹麦vs塞尔维亚 摩洛哥vs波兰 葡萄牙vs德国 阿根廷vs德国 摩洛哥vs塞内加尔 西班牙vs墨西哥 冰岛vs墨西哥 摩洛哥vs哥伦比亚 摩洛哥vs瑞典 克罗地亚vs瑞典 摩洛哥vs日本 伊朗vs韩国 尼日利亚vs韩国 摩洛哥vs巴西 俄罗斯vs比利时 法国vs比利时 摩洛哥vs瑞士 沙特vs巴拿马 澳大利亚vs巴拿马 摩洛哥vs哥斯达黎加 埃及vs突尼斯 秘鲁vs突尼斯 摩洛哥vs塞尔维亚 乌拉圭vs英格兰 丹麦vs英格兰 摩洛哥vs德国 葡萄牙vs波兰 阿根廷vs波兰 摩洛哥vs墨西哥 西班牙vs塞内加尔 冰岛vs塞内加尔 摩洛哥vs瑞典 摩洛哥vs哥伦比亚 克罗地亚vs哥伦比亚 摩洛哥vs韩国 伊朗vs日本 尼日利亚vs日本 伊朗vs比利时 俄罗斯vs巴西 法国vs巴西 伊朗vs巴拿马 沙特vs瑞士 澳大利亚vs瑞士 伊朗vs突尼斯 埃及vs哥斯达黎加 秘鲁vs哥斯达黎加 伊朗vs英格兰 乌拉圭vs塞尔维亚 丹麦vs塞尔维亚 伊朗vs波兰 葡萄牙vs德国 阿根廷vs德国 伊朗vs塞内加尔 西班牙vs墨西哥 冰岛vs墨西哥 伊朗vs哥伦比亚 摩洛哥vs瑞典 克罗地亚vs瑞典 伊朗vs日本 伊朗vs韩国 尼日利亚vs韩国 伊朗vs巴西 俄罗斯vs比利时 法国vs比利时 伊朗vs瑞士 沙特vs巴拿马 澳大利亚vs巴拿马 伊朗vs哥斯达黎加 埃及vs突尼斯 秘鲁vs突尼斯 伊朗vs塞尔维亚 乌拉圭vs英格兰 丹麦vs英格兰 伊朗vs德国 葡萄牙vs波兰 阿根廷vs波兰 伊朗vs墨西哥 西班牙vs塞内加尔 冰岛vs塞内加尔 伊朗vs瑞典 摩洛哥vs哥伦比亚 克罗地亚vs哥伦比亚 伊朗vs韩国 伊朗vs日本 尼日利亚vs日本 法国vs比利时 法国vs巴拿马 法国vs突尼斯 法国vs英格兰 法国vs波兰 法国vs塞内加尔 法国vs哥伦比亚 法国vs日本 法国vs巴西 法国vs瑞士 法国vs哥斯达黎加 法国vs塞尔维亚 法国vs德国 法国vs墨西哥 法国vs瑞典 法国vs韩国 澳大利亚vs比利时 澳大利亚vs巴拿马 澳大利亚vs突尼斯 澳大利亚vs英格兰 澳大利亚vs波兰 澳大利亚vs塞内加尔 澳大利亚vs哥伦比亚 澳大利亚vs日本 澳大利亚vs巴西 澳大利亚vs瑞士 澳大利亚vs哥斯达黎加 澳大利亚vs塞尔维亚 澳大利亚vs德国 澳大利亚vs墨西哥 澳大利亚vs瑞典 澳大利亚vs韩国 秘鲁vs比利时 秘鲁vs巴拿马 秘鲁vs突尼斯 秘鲁vs英格兰 秘鲁vs波兰 秘鲁vs塞内加尔 秘鲁vs哥伦比亚 秘鲁vs日本 秘鲁vs巴西 秘鲁vs瑞士 秘鲁vs哥斯达黎加 秘鲁vs塞尔维亚 秘鲁vs德国 秘鲁vs墨西哥 秘鲁vs瑞典 秘鲁vs韩国 丹麦vs比利时 丹麦vs巴拿马 丹麦vs突尼斯 丹麦vs英格兰 丹麦vs波兰 丹麦vs塞内加尔 丹麦vs哥伦比亚 丹麦vs日本 丹麦vs巴西 丹麦vs瑞士 丹麦vs哥斯达黎加 丹麦vs塞尔维亚 丹麦vs德国 丹麦vs墨西哥 丹麦vs瑞典 丹麦vs韩国 阿根廷vs比利时 阿根廷vs巴拿马 阿根廷vs突尼斯 阿根廷vs英格兰 阿根廷vs波兰 阿根廷vs塞内加尔 阿根廷vs哥伦比亚 阿根廷vs日本 阿根廷vs巴西 阿根廷vs瑞士 阿根廷vs哥斯达黎加 阿根廷vs塞尔维亚 阿根廷vs德国 阿根廷vs墨西哥 阿根廷vs瑞典 阿根廷vs韩国 冰岛vs比利时 冰岛vs巴拿马 冰岛vs突尼斯 冰岛vs英格兰 冰岛vs波兰 冰岛vs塞内加尔 冰岛vs哥伦比亚 冰岛vs日本 冰岛vs巴西 冰岛vs瑞士 冰岛vs哥斯达黎加 冰岛vs塞尔维亚 冰岛vs德国 冰岛vs墨西哥 冰岛vs瑞典 冰岛vs韩国 克罗地亚vs比利时 克罗地亚vs巴拿马 克罗地亚vs突尼斯 克罗地亚vs英格兰 克罗地亚vs波兰 克罗地亚vs塞内加尔 克罗地亚vs哥伦比亚 克罗地亚vs日本 克罗地亚vs巴西 克罗地亚vs瑞士 克罗地亚vs哥斯达黎加 克罗地亚vs塞尔维亚 克罗地亚vs德国 克罗地亚vs墨西哥 克罗地亚vs瑞典 克罗地亚vs韩国 尼日利亚vs比利时 尼日利亚vs巴拿马 尼日利亚vs突尼斯 尼日利亚vs英格兰 尼日利亚vs波兰 尼日利亚vs塞内加尔 尼日利亚vs哥伦比亚 尼日利亚vs日本 尼日利亚vs巴西 尼日利亚vs瑞士 尼日利亚vs哥斯达黎加 尼日利亚vs塞尔维亚 尼日利亚vs德国 尼日利亚vs墨西哥 尼日利亚vs瑞典 尼日利亚vs韩国 据国际足联FIFA官网最新公布消息得知随着伊朗最后提交了23人大名单,北京时间6月4日,2018年俄罗斯世界杯32强最终名单全部出炉,736位球员 完整名单已经全部就绪。接下来让我们共同了解下2018年俄罗斯世界杯32支国家队最新的23人大名单及相关球员信息。 A组大名单 2018年世界杯俄罗斯国家队23人大名单 门将:阿金费耶夫(莫斯科中央陆军),加布罗夫(布鲁日),鲁涅夫(圣彼得堡泽尼特)   后卫:格拉纳特(喀山红宝石),伊格纳舍维奇(莫斯科中央陆军)库德里亚绍夫(喀山红宝石),库捷波夫(莫斯科斯巴达),塞梅诺夫(格罗兹 尼艾卡马特),斯莫尔尼科夫(圣彼得堡泽尼特),马里奥-费尔南德斯(莫斯科中央陆军)   中场:加辛斯基(克拉斯诺达尔),戈洛文(莫斯科中央陆军),扎戈耶夫(莫斯科中央陆军),叶罗辛(圣彼得堡泽尼特),日尔科夫(圣彼得堡泽尼 特),佐布宁(莫斯科斯巴达),库兹亚耶夫(圣彼得堡泽尼特),安东-米兰丘克(莫斯科火车头),萨梅多夫(莫斯科斯巴达),切里舍夫(比利亚雷亚尔 ),   前锋:久巴(图拉兵工厂),阿列克谢-米兰丘克(莫斯科火车头),斯莫洛夫(克拉斯诺达尔) 俄罗斯国家队主力阵容预测: 门将:阿金费耶夫 后卫(从左到右):库德里亚绍夫、格拉纳特、费尔南德斯 中场(从左到右):日尔科夫、扎戈耶夫、格卢沙科夫、戈洛温、萨梅多夫 前锋(从左到右):斯莫洛夫、米兰丘克 俄罗斯小组赛赛程   6月14日 23:00俄罗斯vs沙特   6月20日 2:00俄罗斯vs埃及   6月25日 22:00乌拉圭vs俄罗斯 2018俄罗斯世界杯沙特国家队23人大名单 俄罗斯世界杯埃及国家队23人大名单 2018世界杯乌拉圭最新23人大名单 北京时间6月2日,乌拉圭公布出征2018俄罗斯世界杯的23人大名单,苏亚雷斯、卡瓦尼领衔最新国家足球队阵容,戈丁、吉梅内斯坐镇后防。北京 时间6月15日20:00,2018俄罗斯世界杯32强小组赛分组:乌拉圭将首先与同属A组的埃及展开较量,但后者的当家球星萨拉赫因为伤病出战成疑。6 月20日和25日,乌拉圭将分别与沙特和东道主俄罗斯交手。 2018乌拉圭世界杯23人大名单:   门将:穆斯莱拉(加拉塔萨雷)、M-席尔瓦(瓦斯科达伽马)、坎帕纳(阿根廷独立)   后卫:戈丁(马德里竞技)、科茨(葡萄牙体育)、希门尼斯(马德里竞技)、佩雷拉(波尔图)、加斯顿-席尔瓦(阿根廷独立)、卡塞雷斯 (拉齐奥)、瓦雷拉(佩纳罗尔)   中场:N-南德斯(博卡青年)、托雷拉(桑普多利亚)、贝西诺(国际米兰)、本坦库尔(尤文图斯)、卡洛斯-桑切斯(蒙特雷)、C-罗德里 格斯(佩纳罗尔)、阿拉斯凯塔(克鲁塞罗)、拉克索尔特(西雅图海湾人)、乌雷塔维斯卡亚(蒙特雷)   前锋:斯图亚尼(赫罗纳)、马克西-戈麦斯(塞尔塔)、卡瓦尼(巴黎圣日耳曼)、苏亚雷斯(巴塞罗那)拉圭主力阵容名单预测:   门将:穆斯莱拉   后卫(从左到右):卡塞雷斯、希门尼斯、戈丁、马克西-佩雷拉   中场(从左到右):C-罗德里格斯、本坦库尔、贝西诺、南德斯   前锋(从左到右):苏亚雷斯、卡瓦尼 乌拉圭小组赛赛程   6月15日 20:00 埃及 vs 乌拉圭   6月20日 23:00 乌拉圭 vs 沙特阿拉伯   6月25日 22:00 乌拉圭 vs 俄罗斯北京时间5月21日,西班牙国家队公布了2018俄罗斯世界杯23人大名单,伊涅斯塔领衔这份大名单,切尔西前 锋莫拉塔落选。世界杯西班牙23人阵容大名单:   门将:德赫亚(曼联),雷纳(那不勒斯),科帕(毕尔巴鄂竞技)   后卫:阿尔巴(巴萨),蒙雷亚尔(阿森纳),皮克(巴萨),拉莫斯(皇马),纳乔(皇马),卡瓦哈尔(皇马),奥德里奥索拉(皇家社会 ),阿斯皮利奎塔(切尔西)   中场:布斯克茨(巴萨),伊涅斯塔(巴萨),伊斯科(皇马),阿森西奥(皇马),大卫-席尔瓦(曼城),蒂亚戈(拜仁),科克(马竞) ,萨乌尔(马竞)   前锋:迭戈-科斯塔(马竞),阿斯帕斯(塞尔塔),巴斯克斯(皇马),罗德里戈(巴伦西亚)西班牙国家队主力阵容:   门将:德赫亚   后卫(从左到右):阿尔巴、皮克、拉莫斯、卡瓦哈尔   中场(从左到右):伊涅斯塔、布斯克茨、蒂亚戈   前锋(从左到右):伊斯科、科斯塔、席尔瓦 以下是西班牙世界杯小组赛赛程时间对阵详情: 6月15日23:00 摩洛哥-伊朗 6月16日02:00 葡萄牙-西班牙 6月20日20:00 葡萄牙-摩洛哥 6月21日02:00 伊朗-西班牙 6月26日02:00 伊朗-葡萄牙 6月26日02:00 西班牙-摩洛哥北京时间5月18日,葡萄牙足协公布23人世界杯参赛球员名单,C罗将领衔葡萄牙国家足球队出征俄罗斯。葡萄牙国家 队世界杯23人大名单:门将:安东尼-洛佩斯(里昂),贝托(哥兹塔比),帕特里西奥(葡萄牙体育)   后卫:布鲁诺-阿尔维斯(流浪者),塞德里克-苏亚雷斯(南安普顿),丰特(大连一方),马里奥-鲁伊(那不勒斯),佩佩(贝西克塔斯) ,格雷罗(多特蒙德),里卡多-佩雷拉(波尔图),鲁本-迪亚斯(本菲卡)   中场:阿德里安-席尔瓦(莱斯特城),布鲁诺-费尔南德斯(葡萄牙体育),若昂-马里奥(西汉姆联),穆蒂尼奥(摩纳哥),曼努埃尔-费尔 南德斯(莫斯科火车头),威廉-卡瓦略(葡萄牙体育)   前锋:安德烈-席尔瓦(AC米兰),伯纳多-席尔瓦(曼城),C罗(皇家马德里),热尔松-马丁斯(葡萄牙体育),格德斯(瓦伦西亚),夸雷 斯马(贝西克塔斯)。葡萄牙国家队主力阵容名单:   门将:帕特里西奥   后卫(从左到右):格雷罗、佩佩、罗兰多、塞德里克   中场(从左到右):贝纳尔多·席尔瓦、威廉·卡瓦略、穆蒂尼奥、夸雷斯马   前锋(从左到右):安德烈·席尔瓦、C罗 2018世界杯葡萄牙队B组小组赛赛程   6月16日 2:00 葡萄牙-西班牙   6月20日 20:00 葡萄牙-摩洛哥   6月26日 2:00 伊朗-葡萄牙 京时间5月18日,法国国家队主教练德尚公布了2018年俄罗斯世界杯23人大名单,格列兹曼、姆巴佩、博格巴等巨星悉数入围法国国家队阵容。 门将:洛里(热刺),曼丹达(马赛),阿雷奥拉(巴黎圣日耳曼);   后卫:瓦拉内(皇家马德里),乌姆蒂蒂(巴塞罗那),门迪(曼城),金庞贝(巴黎圣日耳曼),西迪贝(摩纳哥),埃尔南德斯(马德里竞技),拉米( 马赛),帕瓦尔(斯图加特);   中场:博格巴(曼联),坎特(切尔西),马图伊迪(尤文图斯),托利索(拜仁慕尼黑),恩宗齐(塞维利亚);   前锋:格列兹曼(马德里竞技),吉鲁(切尔西),姆巴佩(巴黎圣日耳曼),登贝莱(巴塞罗那),费基尔(里昂),勒马尔(摩纳哥),托万(马赛)。 候补名单:   本-耶德尔(塞维利亚),科曼(拜仁慕尼黑),科斯蒂(波尔多),德比希(圣埃蒂安),迪涅(巴塞罗那),拉卡泽特(阿森纳),马夏尔(曼联),拉比 奥(巴黎圣日耳曼),萨科(水晶宫),西索科(热刺),祖马(斯托克城)。 法国国家队首发阵容名单预测(4-2-3-1): 门将:洛里 防线(从左至右):门迪、乌姆蒂蒂、瓦拉内、西迪贝 中场(从左至右):博格巴、坎特 前场(从左至右):姆巴佩、格列兹曼、登贝莱 锋线:吉鲁 法国队小组赛赛程   6月16日 18:00 法国 - 澳大利亚   6月21日 02:00 法国 - 秘鲁   6月26日 22:00 法国 - 丹麦 B组大名单 俄罗斯世界杯西班牙23人大名单 2018年世界杯葡萄牙23人大名单 摩洛哥2018世界杯最新23人大名单 2018俄罗斯世界杯伊朗国家队23人大名单 C组大名单 法国国家队2018世界杯23人大名单 俄罗斯世界杯澳大利亚国家队23人大名单 秘鲁国家队2018年世界杯23人大名单 2018世界杯丹麦23人大名单 D组大名单 阿根廷俄罗斯世界杯23人大名单 2018年世界杯冰岛国家队23人大名单 克罗地亚2018世界杯23人大名单 尼日利亚俄罗斯世界杯23人大名单 E组大名单 2018俄罗斯世界杯:巴西国家队最新23人大名单 2018瑞士国家队世界杯23人大名单 最新球队阵容 2018年世界杯哥斯达黎加国家队最新23人大名单 塞尔维亚2018世界杯23人大名单 最新国家队阵容 F组大名单 2018俄罗斯世界杯:德国国家队最新23人大名单 墨西哥国家队2018世界杯阵容 最新23人大名单 瑞典2018世界杯国家足球队阵容 最新23人大名单 韩国2018世界杯最新23人大名单 国家足球队阵容  G组大名单 2018世界杯英格兰国家队23人大名单 俄罗斯世界杯32强:比利时国家队最新23人大名单 2018俄罗斯世界杯:突尼斯最新国家队23人大名单 俄罗斯世界杯:巴拿马国家队23人大名单公布 H组大名单 波兰国家队2018年世界杯国家队最新23人大名单 2018世界杯塞内加尔国家队最新23人大名单 2018俄罗斯世界杯:哥伦比亚国家队最新23人大名单 2018世界杯日本国家队23人大名单最新阵容